Metodología para la evaluación automatizada de la expresión del receptor de vitamina D mediante técnica inmunocitoquímica / Methodology of automated Vitamin D receptor immunocytochemical expression análisis

Introducción: la citología permite examinar células de un tejido de manera mínimamente invasiva, sin embargo, la capacidad de realizar técnicas complementarias como la inmunocitoquímica (ICQ) no está exenta de dificultades. Es el objetivo de nuestro trabajo presentar una metodología que permita la utilización de ICQ automatizada asociada a un análisis automatizado mediante técnica de patología digital. Métodos: se incluyeron 5 sujetos sanos y se obtuvieron muestras de superficie ocular utilizando un citocepillo. La muestra fue procesada de manera automatizada mediante citología en fase líquida. Posteriormente se realizó ICQ automatizada para detectar la positividad nuclear del receptor de vitamina D. Para la evaluación, se utilizaron dos métodos: cuantificación directa bajo microscopio de luz y análisis automatizado usando analizador de imágenes en las diapositivas digitales obtenidas con un Scanner. El porcentaje de positividad encontrado con ambos métodos fueron comparados utilizando la prueba de Kappa. Resultados: todas las muestras presentaron una celularidad adecuada. En todos los casos fue posible realizar ICQ automatizada, más aún, todas las muestras presentaron una calidad óptima. Al comparar ambos métodos (manual versus automatizado) se observó un nivel de acuerdo sustancial (Kappa=0,69). Conclusiones: la metodología presentada en este manuscrito permite la evaluación automatizada de marcadores inmunohistoquímicos de la superficie ocular de manera mínimamente invasiva, siendo similar al conteo manual, pero más objetivo y reproducible. Esta técnica podría ser útil para el estudio proteómico en patologías como la enfermedad por ojo seco.

Introduction: Cytology tests use small amounts of tissue samples for diagnosis as a minimally invasive technique; however, the ability to perform complementary methods such as immunocytochemistry (ICC) is not without difficulties. The aim of our work is to present a method that allows the use of automated ICC associated with an automated image analysis using digital pathology. Methods: Five healthy subjects were included, and ocular surface samples were obtained using a cytobrush. The sample was processed as liquid-based cytology. Automated ICC was subsequently performed to detect vitamin D receptor nuclear positivity. Two methods were used for evaluation: manual counting under a light microscope and automated analysis using an image analyzer on digitized slides. The percentage of positivity found in both methods was compared using the Kappa test. Results: All samples presented adequate cellularity. In all cases, it was possible to perform automated ICC; moreover, all samples presented optimal quality. When comparing both methods (manual versus automated), a substantial level of agreement was seen (Kappa=0.69). Conclusions. The method presented in this manuscript allows the minimally invasive automated evaluation of ocular surface ICC markers, being like manual counting but more objective and reproducible. This technique could be useful for proteomic study in pathologies such as dry eye disease.

Leucemia linfocítica b em cão jovem: relato de caso / B - lymphocytic leukemia in young dog: case report / Leucemia linfocítica b en perro joven: relato de caso

O presente relato teve como objetivo descrever um caso de leucemia linfocítica B em um cão da raça maltês, fêmea, com três anos de idade, demonstrando a metodologia de diagnóstico e a variação da patologia clínica após o tratamento exclusivamente por esplenectomia. A linfocitose acentuada observada no hemograma e presença proliferativa de linfócitos na medula óssea determinou a suspeita da leucemia linfocítica. A leucemia linfocítica B foi diagnosticada por meio da citologia aspirativa da medula óssea, imunocitoquímica e citometria de fluxo. O tratamento foi exclusivamente por esplenectomia e dois anos após a cirurgia o animal não apresentou recidiva da afecção.

This report aimed to describe a case of B lymphocytic leukemia in maltese female dog, three years old, demonstrating the methodology of diagnostic and variation of clinical pathology after treatment exclusively by splenectomy. The accentuate lymphocytes observed in blood counts and presence of proliferative lymphocytes in the bone marrow were determined to diagnostic of lymphocytic leukemia. The B lymphocytic leukemia was diagnosed by bone marrow aspiration cytology, immunocytochemistry and flow cytometry. The treatment was exclusively by splenectomy and two years after the surgery the animal showed no recurrence of the disease.

El objetivo de ese relato ha sido describir un caso de leucemia linfocítica B en un perro, raza maltés, hembra, de tres años, demostrando la metodología de diagnóstico y la variación de la patología clínica, después del tratamiento exclusivamente por esplenectomía. La linfocitosis aguda, observada en el hemograma, y la presencia de proliferación de linfocitos en la médula ósea, determinó la sospecha de leucemia linfocítica. La leucemia linfocítica B fue diagnosticada mediante la citología por aspiración de médula ósea, inmunocitoquímica y citometría de flujo. El tratamiento fue exclusivamente por esplenectomía y dos años después de la cirugía el animal no mostró recurrencia de la enfermedad.

HER2/neu status in breast cancer specimens: comparison of immunohistochemistry (IHC) and fluorescence in situ hybridization (FISH) methods / Estado del HER2/neu en especímenes con cáncer de mama: comparación entre los métodos de inmunohistoquímica (IHC) y fluorescencia de hibridación in situ (FISH)

HER2 amplification or overexpression is considered as disease outcome and a predictive marker of response to treatment in breast cancer. The present study aimed to compare the results of IHC and FISH for determining HER2 and to search the interpretational differences. Samples (n= 169), of which 31 were the paraffin blocks sent from outer centers, that underwent FISH analysis for HER-2 were included. Samples were re-reviewed by IHC in our laboratory. FISH test was negative in 131 (77.5%) and positive in 38 (22.5%). When those with previous IHC 0-1+ were re-reviewed, the results were found again 0-1+ and none of them was FISH positive. Inconsistency between re-reviewed IHC and previous IHC results was 25% for those with 2+ score and 11% for those with 3+ score. Consistency between IHC and FISH was 17% and 67% for previous IHC 2+ and 3+, respectively, whereas it was 23% and %75 for re-reviewed IHC 2+ and 3+, respectively. Whilst 79% of the samples evaluated as 2+ by the inexperienced pathologist were found to be 0-1+ on the re-review, all of them were FISH negative. According to our results, we suggest that samples with IHC 2+ should be re-reviewed by consulting with an experienced pathologist.

La amplificación o sobreexpresión de HER2 es un marcador predictivo de la respuesta al tratamiento en el cáncer de mama y es considerada como resultado de esta patología. El presente estudio tuvo como objetivo comparar los resultados de IHC y FISH para la determinación de HER2 y buscar diferencias de interpretación. Las muestras (n= 169), de las cuales 31 eran bloques de parafina, fueron enviadas desde centros externos y sometidas a análisis FISH para HER-2. Las muestras fueron revisadas en nuestro laboratorio con la prueba IHC. La prueba FISH resultó negativa en 131 casos (77,5%) y positiva en 38 (22,5%). Cuando se re-examinaron aquellos casos con resultados previos de IHC 0-1+, se encontró que los resultados fueron iguales (0-1+) y ninguno de ellos fue positivo para FISH. Se encontró inconsistencia entre los casos previos y las nuevas revisiones con IHC y fueron del 25% para aquellos casos con puntuación 2+ y del 11% para aquellos con 3+ de puntuación. La consistencia entre IHC y FISH fue del 17% y del 67% para casos previos analizados con IHC 2+ y 3+, respectivamente, mientras que fue de 23% y 75% para los reanalizados con IHC 2+ y 3+, respectivamente. Mientras que en el 79% de las muestras evaluadas con puntuación 2+ por patólogo inexperto resultaron ser 0-1 + con la nueva revisión, todos estos casos fueron FISH negativos. De acuerdo con nuestros resultados, sugerimos que las muestras con puntuación 2+ de IHC deben ser re-evaluadas por un patólogo experimentado.

Diagnóstico precoz del cáncer de cuello uterino asociado a la infección por virus papiloma humano / Early diagnosis of cervical cancer associated to human papillomavirus

La infección persistente por ciertos tipos de alto riesgo oncogénico de virus papiloma humano (VPHAR) es el principal factor de riesgo para el desarrollo de cáncer de cuello uterino y sus lesiones precursoras. Los VPHAR inducen alteraciones moleculares durante todo el proceso de carcinogénesis cervical, que provocan la acumulación de errores genéticos, con la consecuente inestabilidad genética y transformación maligna. Estas alteraciones son producidas por la acción directa de las oncoproteínas virales E6 y E7 sobre las principales proteínas celulares supresoras de tumor, p53 y pRb, respectivamente, y pueden ser monitoreadas durante el surgimiento de la lesión neoplásica, mediante el uso de biomarcadores. En este artículo se revisan las últimas tendencias sobre el uso del estudio inmunocitoquímico, como una prueba complementaria a la citología y a la detección y tipificación de VPHAR en la evaluación de la expresión de biomarcadores como la proteína inhibidora de la proliferación celular p16INK4a, marcador único o combinada con otros biomarcadores, que puedan contribuir eficazmente en la detección de las pacientes con mayor riesgo a desarrollar neoplasia del cuello uterino asociada a la infección por VPHAR, durante la pesquisa de cáncer de cuello uterino de rutina y en el manejo clínico adecuado y oportuno.

Persistent infection with certain types of high oncogenic risk human papillomavirus (HR-HPV) is the main risk factor for developing cervical cancer and its precursor lesions. HR-HPV induces molecular changes during cervical carcinogenesis, causing the accumulation of genetic anomalies, with subsequent genetic instability and malignant transformation. These alterations are produced by the direct action of the E6 and E7 viral oncoproteins on principal tumor cell suppressor proteins, p53 and pRb, respectively, and can be monitored during growth of the neoplastic lesion using biomarkers. In this paper we review the latest trends on the use of immunocytochemistry as a complementary test to cytology and HR-HPV detection and typing in evaluating expression of biomarkers such as the p16INK4a cell proliferation inhibitor protein, as a single marker or combined with other biomarkers, which can contribute effectively to the detection of patients with increased risk of developing cervical neoplasia associated with HR-HPV infection during routine screening for cervical cancer and in appropriate clinical management.

Detection of white spot syndrome virus in Brazil using negative staining, immunoelectron microscopy and immunocytochemistry techniques / Detección del virus del síndrome de mancha blanca en el Brasil utilizando inmunomicroscopía e inmunomarcación con partículas de oro coloidal

In this study thirty shrimp samples from commercial marine shrimp (L. vannamei) farms of southern region of Brazil were obtained. Hepatopancreas and shell scrapings fragments collected in these animals were processed by transmission electron microscopy using negative staining (rapid preparation), immunoelectron microscopy and immunocytochemistry (immunolabelling with colloidal gold particles) techniques. On the transmission electron microscopy a great number of white spot virus particles, ovoid or bacilliform-to-ellipsoid, measured 230-290 nm in length and 80-160 nm in diameter with intra-nuclear projections were visualized by the negative staining technique in 27 (90 percent) out of 30 samples examined. Using immunoelectron microscopy technique, the anti-VP 664 serum agllutinated a large number of particles formed by antigen-antibody interaction. In the immunocytochemistry technique, the antigen-antibody reaction was styrongly marked by the particles of colloidal gold over the virus. Notably, this is the first report, to our knowledge, describing use of these microscopy techniques to study Brazilian L. vannamei marine shrimp samples; moreover, this methodology also appears to be a viable complementary tool for diagnosing the presence of the white spot virus within shrimp tissues. Importantly, these are the first photoelectron micrographs of the WSSV in Brazil.

Se obtuvieron para el estudio 30 muestras de camarones marinos comerciales (L. vannamei) de las granjas de la región sur de Brasil. Fueron procesados fragmentos de hepatopáncreas y raspados internos del cefalotórax recogidos en estos animales por microscopía electrónica de transmisión con tinción negativa (preparación rápida), inmunomicroscopía y técnicas de inmunocitoquímica (inmunomarcación con partículas de oro coloidal). En la microscopía electrónica de transmisión de un gran número de partículas de virus de la mancha blanca, ovoide o elipsoidal a baciliformes, medían 230-290 nm de longitud y 80-160 nm de diámetro. En 27 (90 por ciento) de las 30 muestras examinadas intra-nuclear proyecciones se visualizaron mediante la técnica de tinción negativa. Utilizando una técnica de inmunomicroscopía electrónica, el anti-suero VP 664 reunió a un gran número de partículas formadas por la interacción antígeno-anticuerpo. En la técnica de inmunocitoquímica, la reacción antígeno-anticuerpo fue fuertemente reforzada por las partículas de oro coloidal en los virus. En particular, en Brasil este es el primer informe, a nuestro entender, que describe el uso de estas técnicas de microscopía en muestras de camarón marino L. vanamei. Además, esta metodología también parece ser una herramienta complementaria viable para diagnosticar la presencia del virus de la mancha blanca en tejidos de camarón. Es importante destacar que estas son las primeras fotos en microscopia electrónica del WSSV obtenidas en Brasil.

CHARACTERIZATION OF Salvia bogotensis ANTI-LECTINIGYS AND THEIR APPLICATION IN IMMUNOCYTOCHEMICAL STUDIES INVOLVING TN ANTIGEN DETECTION / CARACTERIZACIÓN DE IGYS ANTI-LECTINA DE Salvia bogotensis Y SU APLICACIÓN EN ESTUDIOS CITOQUÍMICOS PARA LA DETECCIÓN DEL ANTÍGENO TN / CARACTERIZAÇÃO DA IGYS ANTI-LECTINA DE Salvia bogotensis E A SUA APLICAÇÃO EM ESTUDOS CITOQUÍMICOS PARA A DETECÇÃO DO ANTIGÉNIO TN

Immunoglobulins isolated from egg yolk (IgY) are tools which are currently used in different fields of the biological sciences; they have clear advantages over mammalian serum IgGs. We have established the conditions for obtaining anti-Salvia bogotensis lectin IgYs in previous work; their use in immunocytochemical studies requires that their main molecular characteristics are known as well as the conditions for IgY-lectin interaction. Salvia bogotensis lectin (SBoL) can specifically recognise Tn antigen, a recognised tumoral marker in many types of cancer but additional tools are required for evidencing this interaction in cells. Given the availability of S. bogotensis anti-lectin IgY, this work was aimed at molecularly characterising these IgYs and evaluating their application in immunocytochemical studies for detecting Tn antigen in tumour cells. Purified IgYs' isoelectric points, molecular weight and carbohydrate content were determined. Homologous and heterologous lectins were obtained for establishing the specificity of antibody interaction with the lectin; they were assayed by ELLSA. Biotin-or peroxidase-labelled IgYs were prepared; Tn antigen was specifically detected by CELISA and immunocytochemistry in MCF-7 and HeLa cell-lines with the lectin which was revealed with the labelled IgYs. Results showed that anti-SBoL IgY antibodies represent a highly sensitive tool for specific Tn antigen recognition assays.

Las inmunoglobulinas aisladas de la yema de huevo (IgY) son muy utilizadas actualmente en diversos campos de las ciencias biológicas, dadas sus ventajas frente a las IgG séricas de mamíferos. En un trabajo previo establecimos las condiciones de obtención de IgY dirigidas contra la lectina de Salvia bogotensis; su utilización en estudios inmunocitoquímicos requiere conocer sus principales características moleculares y las condiciones para la interacción IgY-lectina. La lectina de Salvia bogotensis (SBoL) reconoce específicamente el antígeno Tn, marcador tumoral en muchos tipos de cáncer, pero se requieren herramientas adicionales para evidenciar esta interacción a nivel celular. Dada la disponibilidad de IgY anti-lectina de S. bogotensis, se realizó este trabajo con el objeto de caracterizar molecularmente estas IgY y evaluar su utilización en estudios inmunocitoquímicos para la detección del antígeno Tn en células tumorales. A las IgY purificadas se les determinó su punto isoeléctrico, peso molecular y contenido de carbohidratos. Para establecer la especificidad de interacción IgY-SBoL se obtuvieron lectinas homólogas y heterólogas y se ensayaron por ELLSA. La detección del antígeno Tn en las líneas celulares MCF-7 y HeLa con la lectina y las IgYs marcadas con biotina o peroxidasa se realizó por CELISA e inmunocitoquímica. Los resultados mostraron que los anticuerpos IgY anti-SBoL son una herramienta de una alta sensibilidad para los ensayos de reconocimiento específico del antígeno Tn.

Imunoglobulinas isoladas a partir de gema de ovo (IgY) são ferramentas utilizadas actualmente em diferentes áreas das ciências biológicas y apresentam vantagens claras sobre o soro de mamífero IgGs. Em investigações anteriores estabelecemos as condições para obter lectina IgYs anti-Salvia bogotensis. O seu uso em estudos imunocitoquímicos requer que as suas principais características moleculares sejam conhecidas, assim como as condições para a interacção IgY-lectina. A lectina de Salvia bogotensis (SBoL) pode reconhecer especificamente o anti-génio Tn, um reconhecido marcador tumoral em muitos tipos de cancro, mas novas ferramentas são necessárias para evidenciar esta interacção em células. Dada a disponibilidade de anti-lectina IgY de S. bogotensis, este trabalho teve como objectivo a caracterização molecular de estes IgYs e avaliar a sua aplicação em estudos imunocitoquímicos para detectar antigénio Tn em células tumorais. Foram determinados os pontos isoeléctricos, peso molecular e conteúdo de carbohidratos de IgYs purificadas. Lectinas homologas e heterologas foram obtidas para estabelecer a especificidade da interacção de anticorpo com a lectina; estes foram ensaiados por ELLSA. Foram preparados IgYs marcados com biotina ou peroxidase. O antigénio Tn foi detectado especificamente por CELISA e imunocitoquimica em linhas celulares MCF-7 y HeLa com lectina que foi revelada com as IgYs marcadas. Os resultados mostraram que os anticorpos anti-SBoL IgY representam uma ferramenta altamente especifica para ensaios de reconhecimento especifico de antigenio Tn.

Detección de receptores de estrógeno, progesterona y de proteína ligadora de corticosteroides en el tracto genital de hembras caninas (Cannis familiaris): estudio inmunohistoquímico / Detection of estrogen, progestorone receptors and corticosteroid binding globulin in the canine (Cannis familiaris) reproductive female tract: immunohistochemistry study

Los receptores esteroidales sexuales del tracto genital de la hembra tienen importancia dado que, a través de ellos, actúan las hormonas responsables de su desarrollo y de sus cambios morfofuncionales. En su mecanismo, uno de los factores a considerar son las posibles diferencias entre las distintas especies. El objetivo del presente estudio fue evaluar, en la especie canina (N=8), la presencia de receptores de estrógenos (RE), progesterona (RP) y la presencia de proteína ligadora de corticosteroides (CBG) en ovario, oviducto y útero de 3 hembras prepúberes (N=3) y 5 hembras adultas (N=5). La evaluación morfológica se realizó con tinción de hematoxilina-eosina (H-E) e inmunocitoquímica, según la técnica de Stemberger (1979). Los resultados revelaron en animales ciclando, inmunorreactividad (IR) positiva, RE en útero, oviducto y ovario siendo marcada en oviducto. La IR para RP fue leve y varió según el estadio del ciclo. En hembras prepúberes, los RE y RP no fueron evidenciados. La CBG mostró positividad en el tracto durante el ciclo y fue negativa en prepúberes. Se concluye que la presencia de RE y RP es detectable en útero, oviducto y ovario de la hembra canina adulta habiendo variaciones de concentración según el estadio del ciclo estral, siendo su presencia en las prepúberes no evidenciables, a diferencia de otras especies (oveja), donde son detectables en este estadio del desarrollo. La presencia de CBG constante durante el ciclo estral y variable en los otros estadios indica su posible participación en los procesos reproductivos.

The sexual steroid receptors of the genital tract of the female have significant importance since though them the hormones responsible acting. In their mechanism one of the factors to be kept in mind is the possible differences among the diverse species, the objective of this study was to evaluate in canine (N= 8) the presence of receptors of estrogens (ER), progesterone (PR) and the presence of corticosteroid binding globuline (CBG) in ovaries, oviduct and uterus of prepuberal female (N=.3) and matures: (N=5) It was used H-E and immunohistochemical study according to the technique of Stenberger (1979). The results during the oestrus showed: Immune reactivity (IR) positive, ER in uterus and ovary being much stronger in oviduct. The PR varied according the stage of oestrus cycle. In puberal female dog ER and PR were undetectable. The CBG revealed positive in reproductive tract of cycling females but negative in prepubertal. It was concluded that the presence of ER and PR are detectable in uterus, oviduct and ovary of mature female dogs varying their concentration according to the cycle. In prepuberal, its presences come undetectable differing from other species (ovine), in which they are detected at this stage of development. The constant of CBG presence during oeustrus cycle and such variation in other stages of the cycle, it might suggest its participation in the several reproductive activities.

Estudio estructural del huso meiótico de ovocitos bovinos vitrificados / Structural study of meiotic spindle of vitrified bovine oocytes

La verificación de ovocitos bovinos se ha venido utilizando como uno de los protocolos de criopreservación más prometedores. Se ha expresado el temor por los efectos que puede causar la utilización de aditivos crioprotectores sobre la integridad estructural de los ovocitos. En este trabajo, los experimentos fueron conducidos para evaluar e efecto de vitrificación sobre la estructura del huso meiótio y la capacidad de desarrollo de ovocitos bovinos. Para ello, ovocitos acabados de loberar de sus folículos y madurados in vitro fueron expuestos a temperatura ambiente a las soluciones vitrificadoras (etilendlicol y sacarosa), también fueron vitrificados ovocitos inmaduros y madurados in vitro. Los ovocitos fueron teñidos in toto, para evaluar la maduración nuclear y a través de la tinción inmunocitoquímica fueron estudiadas las alteraciones estructurales del huso mieótico. Los ovocitos en estadio de VG, son más sensibles al efecto tóxico causado por los agentes crioprotectores a temperatura ambiente y al proceso de criopreservación, valorados mediante la progresión meiótica y el análisis inmunocitoquímico del huso meiótico. La anomalía más frecuentemente observada fue la ausencia del huso meiótico. La estructura del huso meiótico de ovocitos vitrificados MIV, es más resistentes al daño crioinducido, que los ovocitos vitrificados en estadio de VG. Se recomienda la vitrificación de ovocitos bovinos madurados in vitro.

Bovine oocytes vitrification has been used as one of the most promising cryopreservation protocols. Fear of the effects of cryoprotectant additives on the oocytes structural integrity have been posed. In this study, trials were conducted to evaluate the effects of vitrification over meiotic spindle structure and development capability in bovine oocytes. Based in this evidence, oocytes recently released from their follicles and in vitro matured were exposed at room temperature to vitrifying solutions (ethylenglicol and sucrose), also immature and in vitro matured oocytes were vitrified. Oocytes were stained in toto to assess nuclear maturation stage and meiotic spindle structural alterations were studied by immunocytochemistry. Oocytes at GV stage are more sensitive to the toxic effects caused by cryoprotectant agents at room temperature and to the cryopreservation procedure, assessed through meiotic progression and immunocytochemical analysis of meiotic spindle. The most frequently encountered anomaly was absence of meiotic spindle. Meiotic spindle structure in vitrified and IVM oocytes endure better the cryoinduced injuries compared with oocytes vitrified the GV stage. It is recommend the vitrification of in vitro matured bovine oocytes.

Establecimiento y caracterización de una línea celular derivada de un glioblastoma multiforme / Initiation and characterization of a glioblastoma multiforme derived cell line

Introducción: Las líneas celulares y los cultivos primarios son una excelente herramienta para el estudio de la biología, desarrollo y respuesta a la terapia en tumores cerebrales. Objetivo: Establecer y caracterizar una línea celular derivada de un glioblastoma multiforme como un modelo de estudio in vitro para la extrapolación y aplicación futura en terapia génica. Material y métodos: Se obtuvo una muestra de un paciente con diagnóstico clínico e histopatológico de glioblastoma multiforme, se caracterizó mediante inmunohistoquímica en cortes de tejido y por inmunocitoquímica sobre células cultivadas a partir del tumor desde el inicio del cultivo y durante los seis primeros pases, con dos tipos de marcadores específicos para glía: GFAP (glial fibrillary acidic protein) y S-100 (proteína de unión a calcio). Además, se evaluó la expresión de p53 y Bcl-2, como moduladores de apoptosis. Por último se hizo la caracterización citogenética. Resultados: Histopatológicamente, se confirmó el diagnóstico de glioblastoma multiforme. En los cultivos primarios se encontraron características citomorfológicas propias de un glioblastoma: células fibroblastoides planas, células con escaso citoplasma con 3 ó más procesos y por último bipolares o unipolares. Se encontró una expresión diferencial con los cuatro marcadores, con un patrón de marcaciones a nivel citoplasmático y nuclear a través de los pases estudiados. La línea celular se caracterizó por ser en su mayoría aneuploide con un número modal cromosómico entre 43 y 45, con un gran número de poliploidías (55-102 <4n>, XXYY) y endo-reduplicaciones (end 45, X, -Y). Conclusión: Se estableció una línea celular derivada de un glioblastoma multiforme con un fenotipo estable, con un notable mantenimiento del perfil glial y citogenético.

Introduction: Cell lines and primary cultures are a useful tool for studying basic biology, development and therapy responses in cancer and nervous system tumors. Aim: To establish and characterize a human glioblastoma multiforme (GBM) derived cell line as an in vitro biological model to study nervous system cancer chemotherapy and gene therapy. Materials and methods: A resected tumor piece was obtained from a patient with clinical and histopathological diagnosis of GBM. It was processed to obtain viable cells to culture and histological sections, which were immunostained to glial fibrillary acid protein (GFAP) and S-100 protein (calcium binding protein) and to evaluate expression of apoptosis related proteins p53 and Bcl-2. Finally a cytogenetic evaluation was carried out. Results: Histopathological examination confirmed classic findings of GBM. Typical cytomorphological features of GBM were found in cells of the primary cultures: bipolar or unipolar cells, flat fibroblastoid cells, process-bearing cells with scant cytoplasm and 3 or more processes. It was found a differential expression of the four markers, which had a nuclear and cytoplasmatic staining pattern throughout studied subcultures. Cell line exhibited a high level of aneuploidy with modal chromosomal number between 43-45, with presence of poliploidy (55-102 <4n>, XXYY) and endoreduplication (end 45, X, -Y). Conclusion: It was established a GBM derived cell line with a stable phenotype, maintaining morphological cell and cytogenetic characteristics.